在全球生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展快速上升的時(shí)期，疫情時(shí)代的醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)迎來了新一輪的變革，細(xì)胞與基因治療的藥物被認(rèn)為是未來醫(yī)藥領(lǐng)域發(fā)展的潛力，成為當(dāng)今增速最快的創(chuàng)新藥物領(lǐng)域之一。國家藥監(jiān)局對(duì)這一領(lǐng)域的發(fā)展高度重視，為規(guī)范和指導(dǎo)體內(nèi)基因治療產(chǎn)品的藥學(xué)研發(fā)、生產(chǎn)和注冊(cè)，于今年 5 月 31 日，在國家藥品監(jiān)督管理局的部署下，藥審中心發(fā)布了《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》。

該《指導(dǎo)原則》明確規(guī)定，“生產(chǎn)若使用了腫瘤細(xì)胞系（如 Hela 細(xì)胞）、 致瘤細(xì)胞系，或攜帶有致瘤基因、病毒來源序列的細(xì)胞（如 HEK 293T 細(xì)胞）， 在確保無完整活細(xì)胞殘留的同時(shí)，需對(duì) DNA 的殘留量和殘留片段大小進(jìn)行控制，合理擬定標(biāo)準(zhǔn)限度。如有可能，建議盡量將殘留 DNA 控制在 10ng/劑以內(nèi)，DNA 殘留片段的大小控制在 200bp 以下”。

這是國內(nèi)的指導(dǎo)原則首次將風(fēng)險(xiǎn)性 DNA 殘留片段的大小控制在 200bp 以下進(jìn)行明文規(guī)定，其實(shí)早在 2010 年 FDA 發(fā)布的生物制品相關(guān)指導(dǎo)中，就有強(qiáng)調(diào)根據(jù)不同細(xì)胞系來源和遺傳背景需要，可通過降低殘留 DNA 的含量、減小殘留 DNA 片段的大?。ㄈ?DNase 或其他辦法處理）至功能基因大小以下，在終產(chǎn)品中需要檢測(cè)殘留 DNA 的含量和片段大小分布情況?，F(xiàn)有研究表明，一個(gè)功能基因至少在 200bp 以上，因此，為減少殘留 DNA 風(fēng)險(xiǎn)，F(xiàn)DA 建議殘留 DNA 片段不大于 200bp。DNA 片段大小風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)如下表：

DNA 片段大小風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)劃分

宿主細(xì)胞殘留 DNA 片段 bp	風(fēng)險(xiǎn)因子
＜200	1
200-1000	2
＞1000	3
＞2000	4

注：風(fēng)險(xiǎn)依風(fēng)險(xiǎn)因子數(shù)值遞增

那么，宿主細(xì)胞殘留 DNA 片段大小應(yīng)該用什么技術(shù)平臺(tái)進(jìn)行檢測(cè)呢？

我們分享一篇武漢生物制品研究所發(fā)表的使用毛細(xì)管電泳平臺(tái)分析宿主細(xì)胞殘留 DNA 片段大小的方法驗(yàn)證文章。

1 目的：

建立宿主細(xì)胞殘留 DNA 片段大小分布的檢測(cè)方法，并進(jìn)行驗(yàn)證，為監(jiān)控疫苗生產(chǎn)過程提供依據(jù)。

2 方法：

基于安捷倫公司生產(chǎn)的高靈敏的芯片式毛細(xì)管電泳法，用 MDCK 細(xì)胞基因組 DNA 作為陽性對(duì)照品，建立檢測(cè)方法，并驗(yàn)證方法的檢測(cè)范圍、準(zhǔn)確性及精密度。利用建立的方法分析 MDCK 細(xì)胞基質(zhì)流感疫苗生產(chǎn)過程中間品（H1N1 型流感病毒收獲液、病毒微濾液、核酸酶處理收獲液、濃縮病毒液、層析病毒液）殘留 DNA 片段大小分布。

3 結(jié)果：

注：最小 DNA marker 35 bp，最大 DNA marker 10 380 bp，其余為不同大小的 DNA 片段

圖 4 H1N1 病毒收獲液（A）、病毒微濾液（B）、核酸酶處理收獲液（C）、濃縮病毒液（D）、層析病毒液（E）樣品芯片電泳圖及模擬瓊脂糖凝膠電泳圖

4 結(jié)論：

建立了一種測(cè)定 MDCK 細(xì)胞基質(zhì)流感疫苗宿主細(xì)胞殘留 DNA 片段大小分布的檢測(cè)方法，該方法精密度良好，有望用于連續(xù)細(xì)胞系衍生生物制品的原液檢定和質(zhì)量控制。

精讀文獻(xiàn)請(qǐng)下載：

閆璐瑤等，宿主細(xì)胞殘留 DNA 片段大小分布檢測(cè)方法的建立及驗(yàn)證，中國生物制品學(xué)雜志 2021 年 3 月第 34 卷第 3 期

通過以上文章的學(xué)習(xí)，我們可以知道使用毛細(xì)管電泳的技術(shù)平臺(tái)可以很好地分析宿主細(xì)胞殘留 DNA 片段大小分布。如今對(duì)于體內(nèi)基因治療產(chǎn)品，藥審中心已明確指出宿主細(xì)胞殘留 DNA 片段大小的檢測(cè)建議，相信毛細(xì)管電泳技術(shù)平臺(tái)可以在這一應(yīng)用領(lǐng)域幫助到相關(guān)單位。

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參考文獻(xiàn)

1、閆璐瑤等，宿主細(xì)胞殘留 DNA 片段大小分布檢測(cè)方法的建立及驗(yàn)證，中國生物制品學(xué)雜志 2021 年 3 月第 34 卷第 3 期

2、體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（ 試行），國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心，2022 年 05 月

3、宿主細(xì)胞DNA殘留檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn)手冊(cè)，中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院湖州營(yíng)養(yǎng)與健康產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新中心&湖州申科生物技術(shù)有限公司，2016年12月