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Agilent 2100生物分析儀系統(tǒng)是一個(gè)能夠在獨(dú)立平臺(tái)上完成DNA、RNA、蛋白質(zhì)的分子量測(cè)定、定量分析與質(zhì)量控制的多功能系統(tǒng)。

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工作原理
Agilent 2100 生物分析儀的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)在于它既可用于電泳分離,又能進(jìn)行細(xì)胞熒光參數(shù)的流式分析,既提高了數(shù)據(jù)精確度和重復(fù)性,縮短分析時(shí)間,最大限度地降低樣品消耗,又提高復(fù)雜工作流程的自動(dòng)化和完整性,其工作原理如圖1所示,包括:①樣品自樣品孔處沿微通道移動(dòng);②樣品被注入分離通道;③樣品組分通過(guò)電泳被分離;④各組分通過(guò)其熒光被檢測(cè)并轉(zhuǎn)化成凝膠樣圖像(條帶)和電泳色譜圖(峰)。
實(shí)驗(yàn)流程
2100生物分析儀將傳統(tǒng)的凝膠電泳原理運(yùn)用到芯片上,在很大程度上減少了樣品分離所用的時(shí)間、樣品用量及試劑損耗,實(shí)驗(yàn)操作也以“簡(jiǎn)易”一詞為主,以RNA Nano6000 chip為例,如圖2所示,按Agilent 2100芯片操作SOP依次將膠-染料混合液、marker、Ladder、樣品等加入對(duì)應(yīng)的芯片孔內(nèi),隨即放入 2100 Bioanalyzer進(jìn)行分析。

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結(jié)果分析
安捷倫2100生物分析儀的另一大優(yōu)勢(shì)是通過(guò)芯片實(shí)驗(yàn)室微流控技術(shù)平臺(tái)可對(duì)RNA的完整性、純度或降解程度進(jìn)行精確的、數(shù)字化的評(píng)估。以細(xì)胞樣本的Total RNA為例,從2100 Bioanalyzer分析完的的實(shí)驗(yàn)結(jié)果(如圖3)所示,我們可以清晰明了地得到以下數(shù)據(jù)信息:

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1.RNA Concentration: 能夠較為精確的判斷Total RNA 樣本的濃度;
2.RNA Integrity Number (RIN): 評(píng)估RNA完整性的工具,RNA質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn),直觀地判斷出RNA樣本的降解程度。RIN值范圍為1~10,不同數(shù)值代表著樣品RNA的不同降解程度,通常,RIN值越高,表明RNA質(zhì)量越好,則二代測(cè)序的數(shù)據(jù)質(zhì)量也越高;
RIN值>7,:高質(zhì)量RNA;
RIN值6-7:部分RNA降解,勉強(qiáng)可用;
RIN值<6:質(zhì)量較差RNA。
舉例:從各種組織、細(xì)胞中提取DNA或RNA,同時(shí)做Agilent 2100電泳。
如RNA的電泳圖:RNA電泳,判斷RNA的降解程度,應(yīng)用于基因芯片、高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、普通RT后的定量分析。檢測(cè)靈敏度,定量:25ng/ul;定性:5ng/ul

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DNA電泳,可以準(zhǔn)確判斷雜峰等現(xiàn)象,同時(shí)對(duì)彌散的DNA條帶進(jìn)行范圍鑒定,可以對(duì)低至0.1ng的DNA進(jìn)行電泳判斷,應(yīng)用于高通量測(cè)序前的樣品、文庫(kù)QC。

特點(diǎn)總結(jié)

1. 快速獲得結(jié)果,30 分鐘內(nèi)完成 11 個(gè)樣品的自動(dòng)化分析。

2. 不需要手動(dòng)染色和脫色步驟,所有的程序集中到一個(gè)步驟中實(shí)現(xiàn)。

3. 檢測(cè)精確度提高,預(yù)包裝的試劑和標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)方法可產(chǎn)生高度可再現(xiàn)結(jié)果

4. 可分析多種蛋白質(zhì)樣品,細(xì)胞消化液、柱層析組分、抗體和純化的蛋白質(zhì)

5. 樣品消耗量最低,每個(gè)分析僅需要1 ul稀釋后的樣品。

6. 樣品對(duì)照快速容易,只需單擊重疊分析,具有圖象縮放功能。

7. 數(shù)字?jǐn)?shù)據(jù)易于歸檔和存儲(chǔ),與他人共享數(shù)據(jù),輸出數(shù)據(jù)用于發(fā)表或者進(jìn)行陳述。

8. 在一個(gè)檢測(cè)中可以定性和定量分析,可以進(jìn)行絕對(duì)和相對(duì)定量(半定量)

9. 多種數(shù)據(jù)顯示選項(xiàng),結(jié)果可以類似凝膠的影像、電泳圖譜以及表格格式顯示。

10. 數(shù)字操作,可對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行精細(xì)的分析。

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